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mRNA合成相关

mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μL)

mRNA Cap 2‘-O-Methyltransferase即2‘氧甲基转移酶,来源于携带有牛痘病毒mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase基因的重组大肠杆菌菌株。该酶可利用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体,对RNA的5´末端紧挨帽结构(Cap0)的第一个核苷酸的2´-O位点进行甲基化,形成带有Cap1结构的mRNA。...
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产品介绍

产品概述

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase2'氧甲基转移酶,来源于携带有牛痘病毒mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase基因的重组大肠杆菌菌株。该酶可利用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体,对RNA5´末端紧挨帽结构(Cap0)的第一个核苷酸的2´-O位点进行甲基化,形成带有Cap1结构的mRNACap1结构能够增强mRNA的翻译效率,因此有助于改善mRNA转染后编码蛋白的表达水平。该酶能特异性识别7-甲基鸟苷帽结构(m7GpppCap0),只能作用于带有m7GpppNRNA不可以5´末端为pNppNpppNGpppNRNA作为底物。

 

保存及运输条件

-30~-15℃保存,干冰运输。

 

产品基本信息

产品名称

mRNA Cap   2'-O-Methyltransferase

来源

E.coli

酶活定义

37pH 8.0条件下,1小时内使10 pmol 80 nt带有m7Gppp帽结构的寡核苷酸转录产物甲基化所需要的酶量定义为1个活性单位

储存缓冲液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0);   100 mM NaCl; 1 mM DTT; 0.1 mM EDTA; 0.1% TritonX-100; 50% (v/v) Glycerol

反应缓冲液(

50 mM Tris-HCl, pH   8.0; 5 mM KCl; 1 mM MgCl2; 1 mM DTT

 

使用方法

1、取10 μg Capped RNA1.5 mL离心管中,用RNase Free Water稀释至所需体积。

2、将稀释的RNA65℃加热5 min使RNA变性。

3、冰上放置5 min

4、按顺序加入以下各组分

组分

用量

Denatured Capped RNA

10 μg

10 × Capping Buffer

2 μL

SAM (4 mM)

1 μL

mRNA Cap   2'-O-Methyltransferase (50 U/μl)

1 μL

RNase Free Water

Up to 20 μL

537℃反应1 h(对于长度小于200 ntRNA,将反应时间延长至2小时)。

 

注意事项

1、用于本实验的RNA必须经过纯化并溶解于RNase Free Water

2、反应前热处理RNA是为了打开5'末端的高级结构,热处理时间可根据高级结构的复杂程度调整。

3、SAM室温下不稳定,降解会导致加帽效率变低,因此,建议将SAM放在冰上。

4、建议在反应体系中加入1-2 μL的RNA酶抑制剂(货号:SCB0B006,以提高反应过程中RNA的稳定性。

5、加帽反应效率与RNA 5'端结构和RNA长度有关,如果加帽效率低、RNA 5'端结构复杂或RNA长度较短(≤ 200 nt),建议延长反应时间至2 h

 

 

 

订购信息

产品名称

产品货号

规格

mRNA Cap   2'-O-Methyltransferase (50 U/μL)

SCB0B007A

20 μL

mRNA Cap   2'-O-Methyltransferase (50 U/μL)

SCB0B008B

200 μL

 

 

 


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