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mRNA合成相关

E.coli Poly(A) Polymerase (5 U/μL)

E.coli Poly(A) Polymerase,即E.coli Poly(A)聚合酶,能以不依赖于模板的方式催化ATP以AMP的形式依次掺入到RNA 3‘末端。E.coli Poly(A)聚合酶能以各种RNA单链为底物,不能以DNA为底物,双链RNA以及过短的寡聚核苷酸不推荐作为加尾反应的底物。...
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产品介绍

产品概述

E.coli Poly(A) Polymerase,即E.coli Poly(A)聚合酶,能以不依赖于模板的方式催化ATPAMP的形式依次掺入到RNA 3'末端。E.coli Poly(A)聚合酶能以各种RNA单链为底物,不能以DNA为底物,双链RNA以及过短的寡聚核苷酸不推荐作为加尾反应的底物。E.coli Poly(A)聚合酶具有很高的加尾效率,可以在RNA末端加入20~200A碱基。

 

保存及运输条件

-30~-15℃保存,干冰运输。

 

产品基本信息

产品名称

E.coli Poly(A) Polymerase

来源

E.coli

活性

5 U/μL

储存缓冲液

20   mM Tris-HCl, 300 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.1% Triton   X-100 (pH 7.5, 25°C)

储存条件

-20℃

加尾缓冲液1X

50 mM Tris-HCl (25℃, pH 7.8), 250   mM NaCl, 10 mM MgCl2

酶活定义

37℃pH 8.0条件下,10分钟内将1 nmol AMP掺入RNA所需要的酶量定义为1个活性单位

 

产品应用

1、为RNA添加Poly(A)尾,用于反转录后克隆或亲和纯化。

2、用于RNA 3´末端标记。

3、增加mRNA稳定性,提高mRNA在真核细胞中的翻译效率


 

使用方法

1、反应体系

组分

体积(μL

10 × Poly(A)   Polymerase Buffer

2 μL

ATP (10 mM)

1 μL

RNase Inhibitor (40 U/μL)

0.5 μL

RNA

10 μg

PAP

0.2-1 μL

RNase Free Water

Up to 20 μL

 

2反应条件

37℃反应30 min-1 h加入EDTA至终浓度10 mM65°C20 min终止反应。

 

注意事项

1、Poly(A)加尾长度与E.coli Poly(A) Polymerase酶量、ATP量和反应时间有关。

2、E.coli Poly(A) Polymerase需要有Mg2+等二价离子才能发挥活性。

3、E.coli Poly(A) PolymeraseAMP添加到RNA的3´末端具有较高的选择性,并不会在所有RNA分子中添加相同长度的Poly(A)

 

订购信息

产品名称

产品货号

规格

E.coli   Poly(A) Polymerase (5 U/μL)

SCB0B005A

100 μL

E.coli   Poly(A) Polymerase (5 U/μL)

SCB0B005B

1 mL

 


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