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mRNA合成相关

T7 RNA Polymerase (50 U/μL)

T7 RNA Polymerase,即T7 RNA聚合酶,是一种对T7噬菌体启动子具有高度特异性的DNA依赖性RNA聚合酶。该酶以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与T7启动子下游的DNA一条链互补的RNA。...
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产品介绍

产品概述

T7 RNA Polymerase,即T7 RNA聚合酶,是一种对T7噬菌体启动子具有高度特异性的DNA依赖性RNA聚合酶。该酶以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与T7启动子下游的DNA一条链互补的RNA。

 

产品组分


产品名称

规格

T7 RNA   Polymerase (50 U/μL)

100 μL

Transcription Buffer (10 ×)

1 mL


产品基本信息

产品名称

T7 RNA Polymerase

来源

E.coli

活性

50 U/μL

储存缓冲液

50 mM Tris-HCl (25℃, pH 7.9), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA; 2mM DTT, 0.1%   Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol

储存条件

-20℃

反应缓冲液1X

40 mM Tris-HCl, 27 mM MgCl2,   10 mM DTT, 2 mM spermidine

酶活定义

在37℃  pH8.0的条件下,1小时内使1   nmol的[3H]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位

 

产品应用

用于单链RNA合成,包括mRNA,siRNA,gRNA等各类RNA前体。以及合成RNA探针,还可以利用帽类似物合成加帽RNA。

 

实验流程

1、将各组分解冻分别混匀后,短暂离心使液体收集于管底,置于冰上。

2、体外转录体系

组分

用量

终浓度

Transcription Buffer (10 ×)

2 μL

1 ×

T7 RNA Polymerase (50 U/μL)

2 μL

5 U/μL

ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM)

Each1.5 μL

Each 7.5 mM

Template DNA

0.1-1 μg

-

RNase Free Water

up to 20 μL

-

3、混匀、短暂离心、37℃反应2-3 h。

4、(选做)向反应体系中加入Dnase I,37℃孵育15 min,消化DNA模板。

 

注意事项

1、模板DNA的纯度对体外转录过程影响很大。模板制备过程中的RNase残留会影响体外转录产生的RNA质量。模板DNA应为RNase-Free、高纯度,建议OD260/280为1.8~2.0。

2、添加体系时,模板最后加入。Transcription Buffer (10 ×)中含有亚精胺,亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。

3、反应体系中可添加RNase Inhibitor,防止RNase污染。建议20 μL体系中添加4 U RNase Inhibitor。

4、反应体系中可添加Pyrophosphatase, Inorganic,提高RNA产量。建议20 μL体系中添加0.02 U Pyrophosphatase, Inorganic。

 

订购信息

产品名称

产品货号

规格

T7 RNA   Polymerase (50 U/μL)

SCB0B001A

100 μL

T7   RNA Polymerase (50 U/μL)

SCB0B001B

500 μL

Transcription   Buffer (10 ×)

SCB0A002A

1 mL

Transcription   Buffer (10 ×)

SCB0A002B

5 mL

 


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